
產品概述
本產品是一種簡單、快速、高效的可以用于多種常見重組病毒濃縮的試劑盒,無需超速離心或過柱,濃縮后病毒滴度可提高 5-50 倍,并能有效去除病毒上清液中含有的大量血清蛋白、細胞碎片、基因組 DNA 等。
產品優勢
1. 使用便捷。只需將病毒沉淀試劑(5X)與含病毒的上清液按照 1:4 的比例混合,4 oC 孵育后離心,用自備的 PBS 或基礎培養基重懸病毒沉淀即可。
2. 無需使用超高速離心機長時間離心,普通冷凍離心機 3000-8000 × g 離心 30 min 即可。
3. 病毒濃縮效率高,純化效果好。使用本產品進行病毒濃縮后,病毒滴度可提高 5-50 倍,并能有效去除病毒上清液中含有的絕大部分蛋白、細胞碎片、基因組 DNA 等。儲存及運輸條件冰袋運輸。試劑置于 4 ℃保存,有效期一年。
使用方法
1. 取收集得到的含病毒的上清液,使用 0.45 μm 針頭濾器(PES)過濾以充分沉淀細胞碎片。
注:過濾時,須使用聚醚砜膜(PES)的針頭濾器,其它材質如硝酸纖維(NC)膜可能對病毒有吸附作用。
2. 取過濾后的病毒原液 40 mL,加入 10 mL 4 oC 預冷的病毒濃縮液(病毒原液的 1/4 體積),充分混勻后放于 4 ℃,每 30 min 混合一次,共進行 4~6 次混勻。繼續于 4 oC 放置 6-18 h。
注 1:病毒沉淀試劑(5X)粘性較大,需緩慢吸取,緩慢加入,并且與病毒上清液充分混勻。
注 2:病毒沉淀過程中須保持 4oC,溫度偏高時,會導致沉淀不充分。
注 3:4℃孵育充分后通常溶液會變渾濁,更長的孵育時間(如 4℃過夜)有助于提高病毒回收率,如果樣品體積大,如超過 100ml,建議延長孵育時間,但孵育時間不宜超過 24h。
3. 孵育結束后,3000-8000 x g,4℃離心 30 min,此時離心管底通??梢姲咨恋恚ㄓ袝r沉淀不可見),小心吸棄上清,離心 1~2min,吸走殘余液體。加入原病毒上清液體積的1/10~1/100 的病毒溶解液(PBS 或培養基)(可通過降低病毒溶解液的體積來獲得濃度更大的病毒液),使用移液器小心吹打 20~30 次,重懸病毒沉淀(有時沉淀不可見,需要在沉淀可能形成的區域用移液器小心吹打)。根據后續需要,適當分裝后于-80oC 凍存備用。
注 1:避免劇烈吹打,產生氣泡可能導致病毒失活。
注 2:白色沉淀中除病毒顆粒外,還有極少量血清蛋白和基因組 DNA 等

數據展示
NC-shRNA陰性慢病毒使用E-poly? Fast-Lv包裝試劑盒正向包毒48小時后收毒,測定病毒上清液出毒滴度為2E8 TU/mL。而后采用慢病毒濃縮液分別進行10X和20X濃縮后染毒結果對比如下:
某過表達慢病毒(轉移質粒大小約10 kb)使用E-poly? Fast-Lv包裝試劑盒正向包毒48小時后收毒,測定病毒上清液出毒滴度分別為5E6 TU/mL和1E7 TU/mL。而后采用慢病毒濃縮液分別進行10X和80X濃縮后染毒結果對比如下: