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產(chǎn)品概述

本產(chǎn)品是一種簡(jiǎn)單、快速、高效的超純化慢病毒濃縮液，濃縮后病毒滴度可提高10-100倍，并能有效去除病毒上清液中90%以上的血清蛋白、細(xì)胞碎片、基因組DNA等，效果顯著優(yōu)于PEG濃縮。

產(chǎn)品組成

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

1. 使用便捷。無需長(zhǎng)時(shí)間低溫孵育，僅用普通冷凍離心機(jī)10000 ×g離心2-4 h即可。

2. 病毒濃縮效率高。使用本產(chǎn)品進(jìn)行濃縮，病毒回收率最高可達(dá)約90%，病毒損失量極少。

3. 病毒純度高，純化效果好。相較于傳統(tǒng)的PEG濃縮，本產(chǎn)品可有效去除病毒上清液中90%以上的雜蛋白，有效降低細(xì)胞毒性。

4. 回收的病毒活性滴度高。本產(chǎn)品在濃縮過程中能保持病毒生物活性，能在同等病毒添加量下，達(dá)到更好的染毒效果。

儲(chǔ)存及運(yùn)輸條件

冰袋運(yùn)輸。試劑置于4 ℃保存，有效期一年。

使用方法

1. 取收集得到的含病毒的上清液，使用0.45 μm針式濾器(PES)過濾以充分過濾細(xì)胞碎片。

注：須用聚醚砜膜(PES)的針式濾器過濾，其它材質(zhì)如硝酸纖維(NC)膜可能對(duì)病毒產(chǎn)生吸附。

2. 取過濾后的病毒原液40 mL，加入10 mL 4 ℃預(yù)冷的超純化慢病毒濃縮液（病毒原液的1/4體積），混勻，將離心管轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的離心機(jī)中，4 ℃，10000 xg，離心2-4 h，此時(shí)離心管底通常可見少量白色沉淀。

注1: 超純化慢病毒濃縮液體積應(yīng)為病毒原液的1/4。

注2：為獲得更高病毒回收率，優(yōu)先推薦離心4 h。

注3：離心機(jī)升降速推薦為升9降3，以免破壞離心后的沉淀。

3. 小心吸棄上清，靜置1~2 min，吸液去除所有的殘余液體，同時(shí)注意不要破壞已沉淀的病毒顆粒。向離心管內(nèi)加入1/10~1/100體積冷的病毒重懸液（無菌PBS緩沖液或DMEM培養(yǎng)液），在4 ℃條件下使用移液器小心吹打20~30次重懸病毒沉淀。根據(jù)后續(xù)需要，適當(dāng)分裝后，-80 oC凍存?zhèn)溆谩?/span>

注1：可通過降低病毒重懸液的體積來獲得滴度更高的病毒液。

注2：有時(shí)沉淀不可見，需要在沉淀可能形成的區(qū)域用移液器小心吹打。

注3：避免劇烈吹打，產(chǎn)生氣泡可能導(dǎo)致病毒失活。

注4：全程操作請(qǐng)保持低溫，以防慢病毒滴度下降。

注意事項(xiàng)

1. 為避免病毒失活，濃縮前的病毒上清液或濃縮后的病毒都應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融。建議分裝后標(biāo)記（病毒名稱，年-月-日），置于-80 ℃冰箱保存。

2. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。

數(shù)據(jù)展示

1.將某過表達(dá)慢病毒（2E6 TU/mL）使用不同方式濃縮，其中超純化濃縮離心時(shí)間設(shè)置為4h，PEG濃縮液低溫孵育時(shí)間設(shè)計(jì)為6h，離心后使用PBS重懸沉淀，超濾條件為100KDa離心管，4000xg 4℃離心，體積濃縮60倍，得到的濃縮產(chǎn)物感染HEK293T細(xì)胞，染毒44h結(jié)果對(duì)比如下：

2.某過表達(dá)慢病毒（轉(zhuǎn)移質(zhì)粒大小約10 kb）使用E-poly? Fast-Lv包裝試劑盒正向包毒48小時(shí)后收毒，測(cè)定病毒上清液出毒滴度為2E6 TU/mL。將樣本1（ 20mL 病毒原液）、樣本2 （ 10mL 病毒原液）分別使用超純化慢病毒試劑盒進(jìn)行40X濃縮，濃縮時(shí)間設(shè)置2h、4h兩組對(duì)比，濃縮產(chǎn)物感染HEK293T細(xì)胞，染毒69h結(jié)果對(duì)比如下：

使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒分別對(duì)上述四管濃縮產(chǎn)物進(jìn)行蛋白殘留檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如下：